Mission : Les éléments transposables (ET) ont un impact sur l'organisation et l'intégrité du génome. Les recherches sur le processus d'élimination programmée de l'ADN (PDE) du cilié unicellulaire Tetrahymena ont fourni des informations importantes sur la manière dont les eucaryotes régulent les ET par des mécanismes médiés impliquant de petits ARN non codants. Malgré deux décennies d'efforts pour clarifier le mécanisme d'élimination programmée de l'ADN dirigé par des petits ARN en utilisant la génétique inverse par knock-out de gènes et la purification des complexes protéiques, la plupart des facteurs moléculaires impliqués dans ce processus n'ont pas été identifiés. Pour mieux comprendre le mécanisme moléculaire de la PDE dirigée par les petits ARN, nous optimiserons la méthode de knock-down (KD) des gènes basée sur CRISPR-Cas13d chez Tetrahymena. Ensuite, nous effectuerons des cribles génétiques directs à l'échelle du génome afin d'identifier et de caractériser des gènes non encore décrits impliqués dans la PDE. Pour cela, nous utiliserons des méthodes de tri pour isoler les cellules et les noyaux défectueux dans les différentes étapes de la PDE. Nous pensons que l'étude proposée fournira des informations importantes sur l'évolution du mécanisme de silençage des ET dirigé par les petits ARN, ainsi que des connaissances avancées sur les principes moléculaires de la régulation épigénétique de la chromatine par les petits ARN. En outre, nous pensons que l'établissement d'un protocole de génétique à haut débit basé sur le tri cellulaire révolutionnera la génétique de Tetrahymena dans le but de comprendre les divers processus fondamentaux des eucaryotes. Activités : Expériences de biologie moléculaire Génétique de Tetrahymena Expériences de biochimie