Description : INSERM : U 1141 - NEURODIDEROT NEURODIDEROT EST UNE UNITÉ MIXTE DE RECHERCHE INSERM ET UNIVERSITÉ PARIS CITÉ DÉDIÉE AUX TROUBLES DU NEURODÉVELOPPEMENT. CE LABORATOIRE DE NEUROSCIENCES EST IMPLANTÉ À L'HÔPITAL ROBERT DEBRÉ ET FAIT PARTIE DE L'INSTITUT ROBERT DEBRÉ DU CERVEAU DE L'ENFANT. IL A POUR OBJECTIF D'AMÉLIORER LES CONNAISSANCES, LE DIAGNOSTIC, LE PRONOSTIC ET LE TRAITEMENT DES TROUBLES DU NEURODÉVELOPPEMENT. L'équipe « Développement cortical et microcéphalies », dirigée par Vincent El Ghouzzi et Sandrine Passemard, étudie les anomalies moléculaires et cellulaires à l'origine des microcéphalies génétiques. Nous cherchons notamment à identifier les mécanismes sous-jacents à la microcéphalie primaire humaine (MCPH) causée par des mutations dans les gènes codant pour des protéines du centrosome ou du fuseau mitotique. Pour ce faire, nous utilisons des techniques de biologie cellulaire, de biologie moléculaire et de neurosciences, principalement sur des modèles d'organoïdes cérébraux humains et sur des tissus cérébraux fœtaux présentant des mutations des gènes ASPM, WDR62 et d'autres gènes impliqués dans la MCPH. _MISSION_ Nous recherchons un ingénieur d'étude pour rejoindre notre équipe. Le candidat contribuera à un projet en cours et aidera à finaliser les dernières expériences nécessaires avant la fin du projet. Il s'agit d'un CDD Inserm idéal pour une personne intéressée par les neurosciences du développement humain et à la recherche d'un poste d'un an avant de postuler à un CDI ou à un doctorat. - Prendre en charge des cultures de cellules souches humaines (hiPSCs) de la plateforme. - Savoir manipuler OGM, et lentivirus. - Mettre en œuvre les protocoles de différenciation des hiPSCs en rosettes neurales ou organoides corticaux. - Veiller au respect des règles fondamentales de l'hygiène et sécurité dans le confinement - L2. - Effectuer les immunocytochimies en immunofluorescence sur les rosettes neurales ou organoides cérébraux et les immunohistochimies en fluorescence sur coupes de cerveaux fœtaux à l'aide des protocoles du laboratoire et tester d'autres protocoles selon résultats. - Imager les immunofluorescences au microscope spinning disk ou au confocal - Analyser les résultats et les présenter aux réunions de laboratoire ACTIVITÉS PRINCIPALES - Cultiver et entretenir des lignées de cellules humaines et des cultures primaires humaines (fibroblastes) - Maintenir le statut sanitaire des cultures (mycoplasmes-free) et assurer le respect de l'hygiène/sécurité des cultures et des expérimentateurs. - Réaliser les transfections plasmidiques et transductions lentivirales des cellules sus-citées - Amplifier et caractériser les clones multipotents d'hiPSCs - Différencier les iPSCs en rosettes par acide rétinoique ou noggin, puis en neurones - Préparer les milieux de culture en fonction des différents stades de différenciation des cellules - Prélever et conditionner les culots cellulaires en vue d'une expérimentation - Analyser par western blot ou ELISA les profils d'expression des protéines - Analyser le transcriptome par PCR quantitative - Produire, analyser et synthétiser les résultats de façon exploitable et fiable - Consigner, mettre en forme et assurer la traçabilité des résultats - Amplifier et réaliser les clonages des plasmides nécessaires - Communiquer les données expérimentales ACTIVITÉS ASSOCIÉES - Participer aux tâches collectives : nettoyage de la pièce de culture, ranger, identifier et préparer les produits, assurer le contrôle et l'entretien du matériel - Assurer la gestion des stocks et des commandes et l'achat du petit matériel - Initier les utilisateurs aux techniques du domaine - Assurer la liaison entre les chercheurs et les étudiants ou visiteurs Profil recherché : CONNAISSANCES - Biologie cellulaire et moléculaire - Règles d'hygiène et sécurité : connaissance et application - Microscopie cellulaire - Anglais souhaité SAVOIR-FAIRE - Maitrise des techniques de culture cellulaire, PCR quantitative, western blot, transfection plasmidique et transduction lentivirale - Maitriser le conditionnement des échantillons biologiques - Maitriser les techniques de biologie du domaine expérimental (cultures primaires, lignées et hiPSCs, quantifier l'expression génique par RT-qPCR, analyse protéique en immunofluorescence, Elisa, Western, etc..) - Comprendre et mettre en œuvre un protocole expérimental. - Savoir analyser les images par Image J - Maitriser les outils informatiques d'analyse de données et de statistiques (Excel, GraphPad) - Rédiger les procédures techniques - Transmettre des savoir-faire techniques APTITUDES - Avoir l'esprit critique et de synthèse - Savoir s'organiser de manière autonome et prendre des initiatives - Sens de l'organisation et rigueur SPÉCIFICITÉ(S) / ...