Mission : Mycobacterium abscessus est une mycobactérie non tuberculeuse (MNT) émergente, responsable d'infections pulmonaires sévères, notamment chez les patients atteints de mucoviscidose. Le traitement de ces infections demeure extrêmement difficile en raison de la résistance de cette bactérie à la plupart des classes d'antibiotiques. Nous nous intéressons à l'identification de nouveaux récepteurs de surface appartenant à la famille des tétraspanines, favorisant l'internalisation des mycobactéries par les macrophages. Nos travaux originaux montrent que M. abscessus utilise différentes tétraspanines pour pénétrer et envahir le macrophage durant les premiers stades de la colonisation. Le projet que nous proposons consistera en une approche multidisciplinaire visant à étudier, au niveau cellulaire et moléculaire, la contribution des tétraspanines CD9 et CD63, ainsi que de leurs ligands bactériens, dans l'infection par M. abscessus. Les résultats de ce projet devraient améliorer notre compréhension des événements précoces du processus infectieux. Par ailleurs, cette étude pourrait également aboutir à une nouvelle approche thérapeutique innovante ciblant ces récepteurs de surface et leurs ligands, dans le but d'inhiber le processus d'internalisation des mycobactéries par la cellule hôte et de perturber le processus infectieux. Activités : - Utiliser des techniques biochimiques (production de protéines recombinantes, pull-down, TURBOID, double hybride) pour identifier les ligands bactériens des tétraspanines CD9 et CD63. - Cloner les ligands bactériens dans différents vecteurs afin de les localiser, de les produire sous forme de protéines recombinantes, de les coupler à des billes fluorescentes, de les déléter et de compléter les mutants dans M. abscessus. - Appliquer la technique CRISPR/Cas9 pour générer des macrophages humains déficients en tétraspanines, puis procéder à leur complémentation. - Étudier le rôle des ligands bactériens impliqués dans l'interaction avec CD9 et CD63 lors de l'infection précoce par M. abscessus, en évaluant l'attachement et la viabilité des mutants générés dans des modèles pertinents, incluant des macrophages sauvages ou déficients en tétraspanine infectés. - Réaliser de la microscopie à fluorescence à l'aide d'un microscope confocal et analyser la localisation des ligands bactériens des deux tétraspanines, ainsi que la capacité des mutants de M. abscessus à infecter les macrophages humains et à survivre au fil du temps.