Mission : Sous la responsabilité conjointe du Dr. François Foulquier et du Dr. Ninon Very, vous participerez activement au développement de ce projet à travers les missions suivantes : - Techniques de biologie cellulaire : assurer la culture, la conservation et l'entretien des lignées cellulaires (modèles knock-out) et des fibroblastes issus de patients CDG, réaliser des transfections (transitoires ou stables), ainsi que des analyses du glycoprotéome en microscopie confocale en fluorescence - Techniques de biochimie fonctionnelle et structurale : analyser les glycanes et les glycoprotéines par des approches complémentaires de biochimie (Western-blot, lectin-blot, cytométrie en flux, RTqPCR), de glycomique classique (spectrométrie de masse) et de marquage métabolique à l'aide de précurseurs non naturels de sucres, couplé à des approches de chimie-click - Approches thérapeutiques : contribuer à la mise au point d'une approche thérapeutique pour les CDG associés à des perturbations du transport de protons, notamment par supplémentation en manganèse Activités : 1. Biologie cellulaire (Env. 30% du temps) - Gestion quotidienne des lignées cellulaires et des fibroblastes de patients : mise en culture, comptage, congélation et décongélation - Préparation des milieux de culture et des réactifs nécessaires aux expériences, dans le respect des règles de stérilité et d'utilisation du PSM de type L2 - Ensemencement et traitement des cellules (traitements pharmacologiques, transfection de plasmides, précurseurs de sucres non naturels) - Préparation des échantillons biologiques pour les différentes analyses expérimentales 2. Imagerie cellulaire et cytométrie en flux (Env. 20% du temps) - Fixation et marquage des cellules à l'aide d'anticorps et de lectines pour les analyses en microscopie et en cytométrie en flux - Acquisition et analyse informatique des images obtenues en microscopie confocale et en fluorescence, ainsi que des données issues de la cytométrie en flux via les logiciels dédiés 3. Biochimie et glycomique (Env. 20% du temps) - Analyse des glycanes et glycoprotéines par Western-blot, lectinographie et analyse de l'expression génique par RT-qPCR - Acquisition, traitement et analyse statistique des données expérimentales - Préparation des échantillons destinés aux analyses de spectrométrie de masse et aux approches de marquage métabolique 4. Évaluation des approches thérapeutiques (Env. 15% du temps) - Mise en œuvre des protocoles expérimentaux permettant d'évaluer l'effet de traitements sur les phénotypes cellulaires et les défauts de glycosylation - Suivi et comparaison des résultats obtenus dans les différentes conditions expérimentales - Contribution à l'optimisation des conditions de traitement à visée thérapeutique 5. Vie du laboratoire & Traçabilité (Env. 15% du temps) - Planification et organisation des expériences selon les protocoles établis - Traçabilité rigoureuse des échantillons, des expériences et des résultats sur le cahier de laboratoire (physique ou électronique) - Participation à la gestion des stocks de consommables et réactifs liés à l'activité, et à l'entretien courant des équipements et des espaces de travail - Application et respect strict des consignes d'hygiène et de sécurité (H&S) en environnement de type L2 - Participation au bon fonctionnement collectif de l'équipe et du laboratoire